压力蒸汽灭菌器灭菌效果验证的方法

1.试验材料

① 嗜热芽孢杆菌纸片；噬热芽孢杆菌ATCC7053，含芽孢量5—105CFU/片

② 121℃压力蒸汽灭菌化学指示卡；溴甲酚紫胨水培养基，116℃20分钟高压灭菌后备用。

③ 0—150℃留点温度计

 

2.方法与结果

将嗜热芽孢杆菌纸片用无菌镊子放人密封试管中。化学指示卡和留点温度计放人敞口的试管中。上两种试管各准备5—10份。分别放置在压力蒸汽灭菌器蒸汽口处、底部排气口处及底部水口处或上下左右中间5处。如压力蒸汽灭菌器为二层，则需放10处。留点温度计标化合格后可用于验证试验。

检测前，需将温度计的水银柱甩至40℃以下。每次监测后留点温度计的温差应在1℃之间，则说明压力蒸汽灭菌器内的温度分布是均匀的。

灭菌后的菌片应在严格无菌操作条件下放人灭菌后的溴甲酚紫胨水培养基内。56—60℃培养24-48小时，观察颜色变化。如培养基变为黄色，说明菌片中的嗜热芽孢杆菌尚未*灭活，细菌仍可在培养基中生长，分解葡萄糖产酸变为黄色。如培养基颜色不变化仍为紫色，则说明芽孢菌已灭活。同时要用未经灭菌的纸片放人培养基内作为阳性对照，不加纸片的空白培养基作为阴性对照。化学指示卡上的指示色块，在压力蒸汽灭菌器时，由淡黄色变为黑色。随着颜色变化的深浅，并与对照色相比，可判断灭菌效果是否达到要求。化学指示卡应在干燥处保存。遇潮会变色，影响灭菌效果的观测。压力蒸汽灭菌器必须使蒸汽顺利进入灭菌器内，与灭菌物品接触，并将原有的冷空气排出方可达到灭菌的效果。要进行空载热分布和满载热穿透力验证(满载时不超过总体积的2／3)。二种验证各重复三次，共做六次表。5个点六次试验表明温度均在121 ℃，化学指示卡变黑；程度与对照色一致；培养基均未改变颜色，说明压力蒸汽灭菌器效果合格。